脑—心浸萃琼脂培养基

脑—心浸萃琼脂培养基         (Brain Heart Infusion Agar)

用    途：

广泛用于霉菌、酵母、细菌的培养，包括营养要求较高的微生物的培养，特别用于矿泉水和城市供水中粪性链球菌滤膜法的确证性实验(GB/T 8538-2008和CJ/T148-2001)。

原    理：

月示胨和脑—心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。

配方（每升）：

幼牛脑(提取浸出粉) 200g

牛心(提取浸出粉)   250g

葡萄糖 2g

氯化钠 5g

月示 胨     10g

磷酸氢二钠   2.5g

琼脂 15g

最终pH7.4±0.2

使用方法：

1. 称取本品51g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，121℃灭菌15分钟，做成斜面培养基。

2. 从滤膜上挑取典型菌落，接种到脑—心浸萃琼脂培养基斜面上，在35±0.5℃培养24—48 h。

3. 挑取典型培养物到一片清洁的载玻上，加几滴新鲜的3%的过氧化氢到载玻片的涂抹菌液上，如果没有气泡发生，就显示过氧化氢酶反应为阴性，则菌落可视为粪链球菌，就应该继续如下确证过程。如果有气泡发生，则过氧化氢酶反应为阳性，因此菌落不属于粪链球菌确证试验至此即可结束。

4. 以接种环从脑-心浸萃琼脂培养基上转移一典型菌落到脑-心浸萃液态培养基内，在45℃培养48h。此外也要同时转移一典型菌落到胆汁液态培养中，在35℃培养72h。这种培养基是以无菌的10%牛胆汁加入到60mL无菌的脑-心浸萃液态培养基中面配成。

5. 转移到上述培养之后，若是菌落能得到繁殖，则表示结果为阳性。

6. 计数结果。

菌数/ 100mL = N / V × 100

N——经证实的粪性链球菌菌落数

V——过滤的水样体积（mL）

质量控制：

质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h，结果如下：

菌    名   菌    号 生长状况  

粪性链球菌 CMCC(B)32223   良好

乙型溶血性链球菌 CMCC(B)32210 良好

大肠埃希氏菌   ATCC25922   良好

贮    存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规    格：100g

参考文献:

1. CJ/T148-2001 中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水水质检验 粪性链球菌检测

2. GB/T 8538-2008 中华人民共和国国家标准 饮用天然矿泉水检验方法