改良MC培养基 (Modified Chalmers Agar)
用 途:
用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T16347-1996,GB/T4789.35-2003和SN/T1941.1-2007)。
原 理:
大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解,以辨别乳酸菌;琼脂是培养基的凝固剂;中性红为pH指示剂。
配方(每升):
大豆蛋白胨 5g
牛肉膏粉 5g
酵母膏粉 5g
葡萄糖 20g
乳糖 20g
碳酸钙 10g
琼脂 15g
中性红 0.05g
最终pH6.0±0.2
使用方法:
1、 称取本品80g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,121℃高压灭菌15—20min。
2、 无菌操作将经过充分摇匀的检样25g(或25mL),放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内,振摇均匀,即为1:10稀释液,依次做1:100、1:1000……稀释。
3、 选择2-3个合适的稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,吸取1mL稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做2个平皿。
4、 将培养基凉至50℃左右,如需增强对杂菌的抑制作用,可添加10,000IU硫酸多粘菌素B至100 mL培养基中。 (检样有胖听或开罐后有异味等怀疑有杂菌污染时,可加多粘菌素B,混匀后使用)。
5、 将培养基注入平皿中约15mL(本品含有碳酸钙,摇匀后方可倾注平板),待琼脂凝固后,翻转平板,置于36±1℃温箱中培养72±3h。
6、 选择菌落数在30-300个之间的平皿进行计数。计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽孢的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌落计算出该皿内的乳酸数,然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如,检样10-4的稀释液在改良MC培养基平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实为乳酸菌的是4个,则1 mL检样中乳酸菌数为:
质量控制:
下列菌株接种后于36±1℃培养72h结果如下:
菌 名 菌 号 生长状况 生长特征
保加利亚乳杆菌 As1.1482 良好 平皿底为粉红色,菌落较小,圆形,红色,边缘似星状,直径2±1mm,可有淡淡的晕
乳链球菌 良好 平皿底为粉红色,菌落较小,圆形,红色,边缘整齐,可有淡淡的晕
贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格:250g
参考文献:
1. GB/T 4789.35-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 乳酸饮料中乳酸菌检验
2. GB/T 4789.28-2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 染色法,培养基和试剂
3. GB/T16347-1996 中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验
4. SN/T1941.1-2007中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分 分离与计数方法。