胰蛋白&-亚硫酸盐-琼脂培养基

胰蛋白月示 -亚硫酸盐-琼脂培养基       (Tryptose Sulfite Agar)

用    途：

用于城市供水中滤膜法测定亚硫酸盐还原厌氧菌（梭状芽孢杆菌）孢子。（中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/T  149—2001）

原    理：

胰蛋白胨、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵为硫化氢指示剂；梭状芽孢杆菌将焦亚硫酸钠还原为硫化氢，与铁离子结果形成黑色沉淀。

配方（每升）：

胰蛋白月示   15g

大豆蛋白胨   5g

酵母膏粉 5g

焦亚硫酸钠（Na2S2O5） 1g

柠檬酸铁铵   1g

琼脂 15g

最终pH7.6±0.2

使用方法：

1、称取本品42g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃灭菌15分钟，待冷至50℃左右倾注平皿。

2、 滤膜灭菌

将滤膜放入烧杯中，置于沸水中煮沸灭菌三次，每次15分钟。前两次煮沸后需要更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。

3、 滤器灭菌

视滤器质地采用干热（酒精棉球火焰）或湿热灭菌。

4、 孢子的选择

水样在试验前须放置于水浴锅中，75±1℃加热15分钟。用同样的水样瓶作空白，用温度计检查加热温度。

5、 接种与培养

水样的过滤量要适当：对于饮用水、泉水、井水、海水、地面水和梭状芽孢杆菌轻度污染的水，取100mL过滤；对污染严重的水或废水，可用无菌水稀释后检测。调配一定的稀释度，使在滤膜上生长的黑色菌落分离，而更易于计数。

水样过滤后，用无菌镊子将滤膜过滤面朝下，置于培养皿中，同时使滤膜下无气泡。小心地将18mL约50℃的培养基倾注于培养皿中的膜上。在形成培养基层后，37±1℃培养20±4h和44±4h。如果使用厌氧培养箱，滤膜可放置在琼脂面上，且滤膜面向上。

6、 观察结果。

培养20±4h和44±4h后，计数所有黑色菌落。

7、 分析结果的表述                                          

试验报告应说明所使用的方法，单位体积水样中亚硫酸盐还原厌氧细菌培养44±4h的孢子；孢子数太多，黑色菌落连在一起而难以计数，可采用20±4h培养时间的孢子大约数目。结果以CFU/100mL计。

质量控制：

质控菌株接种后于37±1℃培养24—48h，结果如下：

菌    名 菌    号 生长状况     培养特征

产气荚膜梭菌   HK9051   良好   黑色菌落

破伤风梭菌 HK9041 良好   黑色菌落

贮    存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规    格：250g

参考文献:

1. CJ/T  149—2001中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水水质检验方法