营养琼脂平板

营养琼脂平板(Nutrient Agar Plate)

用    途：

用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定（GB/T4789.28－2003 中4.7和GB15979－2002, GB15979－2002、《中华人民共和国药典》2005年版和GB15981-1995）。

原    理：

蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

配方（每升）：

蛋白胨 10g

牛肉膏粉 3g

氯化钠 5g

琼脂   15g

最终pH 7.3±0.2  

使用方法：

5、 (食品)以无菌操作称取检样25克（或25mL），放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠），充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。

6、 根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

7、 稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

8、 观察结果。

9、 菌落计数方法：

做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

10、 菌落计数的报告：                                                

选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计

A：稀释度的选择：

应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。

若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数；若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。

若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。

若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。

菌落数的报告：

菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。

稀释度选择及菌落数报告方式

例次 稀释液及菌落数 两稀释  菌落总数      报告方式    

液之比  个/g或mL    个/g或mL

10-1         10-2         10-3

1      多不可计    164       20        ——    16 400    16 000或1.6×104

2      多不可计    295       46         1.6     37 750    3 8000或3.8×104

3      多不可计    271      602.2       ——    27 100    27 000或2.7×104

4      多不可计  多不可计   313         ——    31 300   31 0000或3.1×105

5         27        11        5         ——      270       270或2.7×102

6          0         0        0         ——    ＜1×10     ＜10

7      多不可计    305       12         ——    30 500    31 000或3.1×104

质量控制：

本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：

菌    名         菌    号    生长状况              菌落特征

大肠埃希氏菌      ATCC25922     良好      白色—灰白色，圆形，边缘整齐，

表面光滑，湿润。

金黄色葡萄球菌    ATCC6538      良好      黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、

湿润，不透明。

贮    存：贮存于4-8℃。贮存期三个月。

规    格：20个/盒

参考文献:

1. GB15979－2002 中华人民共和国国家标准 一次性使用卫生用品卫生标准

2. GB/T 4789 .2—2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验标准 菌落总数测定

3. GB15981－1995 中华人民共和国国家标准 消毒与灭菌效果的评价方法与标准