中华人民共和国国家标准
粮食、油料检验 还原糖和非还原糖测定法
GB 5513-85
Inspection of grain and oilseedsMethods for determination of reduced sugar and non-reduced sugar
本标准适用于商品粮食中还原糖和非还原糖含量的测定。其中铁氰化钾法主要适用于小麦粉。
1 还原糖测定
1.1 铁氰化钾法
1.1.1 仪器和用具
1.1.1.1 磨口带塞锥形瓶：100ml;
1.1.1.2 量筒：50ml、25ml；
1.1.1.3 移液管：5ml;
1.1.1.4 玻璃漏斗;
1.1.1.5 试管：直径1.8～2.0cm，高约18cm；
1.1.1.6 铝锅：作沸水浴用；
1.1.1.7 电炉：2000W；
1.1.1.8 铁丝笼：放置试管用；
1.1.1.9 试管架；
1.1.1.10 锥形瓶：100ml;
1.1.1.11 微量滴定管：5ml或10ml(刻度0.02ml);
1.1.1.12 分析天平，感量0.0001g。
1.1.2 试剂
1.1.2.1 95％乙醇；
1.1.2.2 乙酸缓冲液：3ml冰Z酸、6.8g乙酸钠和比重1.84的硫酸4.5ml，混合后用水稀释至1000ml；
1.1.2.3 12％钨酸钠溶液：12g钨酸钠Na2WO4·2H2O溶于100ml水中;
1.1.2.4 0.1N铁氰化钾溶液:32.9g干燥纯净的铁氰化钾与44.0g碳酸钠溶于1000ml水中； 1.1.2.5 乙酸盐溶液：70g纯氧化钾和40g硫酸锌溶于水中，再加入200ml冰乙酸，再用水稀释至1000ml，混匀；
1.1.2.6 10％碘化钾溶液：10g纯碘化钾溶于100ml水中，再加一滴饱和氢氧化钠溶液; 1.1.2.7 1％淀粉溶液：1g可溶性淀粉，用少量水润湿调和后，倒入沸水100ml，继续煮沸，搅拌直至溶液清晰；
1.1.2.8 0.1N硫代硫酸钠溶液(按GB 5490-85《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录B进行配制和标定)。
1.1.3 操作方法
1.1.3.1 提取样品液：精确称取粉样5.675g于100ml磨口锥形瓶中，用5ml乙醇浸湿全部试样，再加入50ml乙酸缓冲液，摇匀后再加入2ml钨酸钠溶液，在振荡器上混合振摇5min，取出过滤，弃去最初几滴滤液，收集滤液于干净锥形瓶中，此滤液即为样品测定液。另取一锥形瓶不加试样，同上操作,滤液即为空白液。
1.1.3.2 氧化：精确吸取样品液5ml于试管中，再精确加入5ml铁氰化钾溶液，混合后立即将试管(置铁丝笼中，每次可同时作若干样品测定)放入剧烈沸腾的水浴中，并使管中液面在沸水液面下3～4cm，加热准20min后取出，立即用冷水迅速冷却。
1.1.3.3 滴定：将试管内容物倾入100ml锥形瓶中，用25ml乙酸盐溶液洗荡试管一并倾入锥形瓶中，加5ml10％碘化钾，混匀后，立即用0.1N硫代硫酸钠滴定至淡黄色，再加1ml淀粉溶液，继续滴定直至溶液蓝色消失，记下用去硫代硫酸钠溶液体积(V1)。
1.1.3.4 空白试验：吸取空白液5ml，代替样品液同1.1.3.2和1.1.3.3操作，记下消耗的硫代硫酸钠溶液体积(V0)。
1.1.4 结果计算 还原糖含量先按公式(1)计算出氧化样品液中“还原糖”所需0.1N铁氰化钾溶液体积(V3),再根据此体积(ml)查表1，即可查得试样中含还原糖(以麦芽糖计算)的百分数。按公式(1)计算：
( V0 - V1 ) × N
V3 = ─────────── …................................(1)
0.1
式中：V0--滴定空白液消耗铁氰化钾溶液体积，ml;
V1--滴定样品液消耗铁氰化钾溶液体积，ml；
V3--氧化样品液中还原糖所需0.1N铁氰化钾溶液体积，ml；
N--硫代硫酸钠溶液实际当量浓度。
双试验结果允许差不超过0.05％，求其平均数，即为检验结果。检验结果取小数点后第二位
1.1.5 0.1N铁氰化钾(ml)与还原糖含量对照可查表1。
注：还原糖含量以麦芽糖计算。
1.2 费林氏液法
1.2.1 仪器和用具
1.2.1.1 古氏坩埚：25ml;
1.2.1.2 抽滤瓶：500ml;
1.2.1.3 真空泵或水泵等。
1.2.2 试剂
1.2.2.1 费林氏溶液:
a.碱性酒石酸铜甲液：取硫酸铜结晶34.639g，加适量水溶解，加硫酸0.5ml，再加水至500ml，用精制石棉过滤;
b. 碱性酒石酸铜乙液：取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加适量水溶解，稀释至 500ml，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。
1.2.2.2 精制石棉：先用3N盐酸将石棉浸泡2～3日后，用水洗净。再加10％氢氧化钠溶液浸泡2～3日，倾去溶液，用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。再以3N盐酸浸泡数小时，用水洗至不呈酸性，使之成为微细的软纤维，用水浸泡贮存于玻璃瓶内，作填充古氏坩埚用。
1.2.2.3 0.1N高锰酸钾标准溶液。
1.2.2.4 1N氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4g，加水溶解至100ml。
1.2.2.5 硫酸铁溶液:取硫酸铁50g,加水200ml溶解后,慢慢加入硫酸100ml,冷后加水至1000ml。
1.2.2.6 3N盐酸，取盐酸25ml，加水至100ml。
1.2.3 操作方法
表 1
0.1NK3Fe(CN)6 ml 还原糖 % 0.1NK3Fe(CN)6 ml 还原糖% 0.1NK3Fe(CN)6 ml 还原糖% 0.1NK3Fe(CN)6 ml 还原糖%
0.10 0.05 2.30 1.16 4.50 2.37 6.70 3.79
0.20 0.10 2.40 1.21 4.60 2.44 6.80 3.85
0.30 0.15 2.50 1.26 4.70 2.51 6.90 3.92
0.40 0.20 2.60 1.30 4.80 2.57 7.00 3.98
0.50 0.25 2.70 1.35 4.90 2.64 7.10 4.06
0.60 0.31 2.80 1.40 5.00 2.70 7.20 4.12
0.70 0.36 2.90 1.45 5.10 2.76 7.30 4.18
0.80 0.41 3.00 1.51 5.20 2.82 7.40 4.25
0.90 0.46 3.10 1.56 5.30 2.88 7.50 4.31
1.00 0.51 3.20 1.61 5.40 2.95 7.60 4.38
1.10 0.56 3.30 1.66 5.50 3.02 7.70 4.45
1.20 0.60 3.40 1.71 5.60 3.08 7.80 4.51
1.30 0.65 3.50 1.76 5.70 3.15 7.90 4.58
1.40 0.71 3.60 1.82 5.80 3.22 8.00 4.65
1.50 0.76 3.70 1.88 5.90 3.28 8.10 4.72
1.60 0.80 3.80 1.95 6.00 3.34 8.20 4.78
1.70 0.85 3.90 2.01 6.10 3.41 8.30 4.85
1.80 0.90 4.00 2.07 6.20 3.47 8.40 4.92
1.90 0.96 4.10 2.13 6.30 3.53 8.50 4.99
2.00 1.01 4.20 2.18 6.40 3.60 8.60 5.05
2.10 1.06 4.30 2.25 6.50 3.67 8.70 5.12
2.20 1.11 4.40 2.31 6.60 3.73 8.80 5.19
1.2.3.1 试样处理：准确称 样10～20g放入250ml容量瓶中，加水200ml，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇，到时待冷后加水至刻度，静置后，吸取澄清液200ml于另一250ml容量瓶中,加碱性酒石酸铜甲液10ml和1N氢氧化钠溶液4ml,摇匀,加水至刻度,静置30min, 用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，其余滤液供测定还原糖和非还原糖用。
1.2.3.2 滴定：精密吸取制备的试样溶液50ml于400ml烧杯中，加入碱性酒石酸铜甲、乙液各25ml，盖一表面皿，置电炉上加热，在4min内沸腾，再煮沸2min，趁热用铺有石棉的古氏坩埚(或垂融坩埚)抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯和沉淀，至洗液不呈碱性为止。将古氏坩埚放回原400ml烧杯中，加硫酸铁溶液25ml和水25ml，用玻捧搅拌，使氧化亚铜完全溶解，以0.1N高锰酸钾标准溶液滴定至微红色。同时取水50ml，加碱性酒石酸铜甲、乙液各25ml,做试剂空白试验。
1.2.4 结果计算 相当于试样中还原糖重量的氧化亚铜重量按公式(2)计算：
x = ( V - V0 ) N × 71.54 …............................. (2)
式中：x--相当于试样中还原糖重量的氧化亚铜的重量，mg;
V--试样消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ml;
V0--试样空白消耗高锰酸钾标准溶液的体积，ml；
N--高锰酸钾标准溶液的当量浓度；
71.54--1N高锰酸钾标准溶液1ml相当于氧化亚铜的毫克数。
由所得的氧化亚铜重量，按附录A的表查出相当的还原糖(以葡萄糖计)的重量。
还原糖干基含量按公式(3)计算：
62.5A
还原糖 (干基%) = ─────── …........................(3)
W (100 - M )
式中：A--由附录A表中查得的还原糖(以葡萄糖计)的重量，mg；
W--试样重量,g;
M--试样水分百分率，％。
双试验结果允许差及小数点位数同1.1.4。
注：①煮沸时间必须控制在4min内。可先取水50ml加碱性酒石酸铜甲、乙液各25ml，调节好适当的火力后，再作样品。
②煮沸后的溶液如不呈蓝色，表示糖量过高，可减少试样重量，另作。
2 非还原糖测定
2.1 铁氰化钾法 所需仪器和用具同1.1.1。 所需试剂同1.1.2。
2.1.1 操作方法 分别吸取1.1.3.1样品液及空白液各5ml于试管中，先在剧烈沸腾的水浴中加热15min (样品液中非还原糖转化为还原糖)，取出迅速冷却后，加入碱性铁氰化钾溶液5ml，混匀后，再放入沸腾水浴中继续加热20min，取出迅速冷却后，立即按1.1.3.3方法进行滴定，分别记下滴定样品液及空白液消耗硫代硫酸钠体积(V1’，V0’)。
2.1.2 结果计算 非还原糖含量先按公式(4)计算，求出氧化样品液中总”还原糖”所需0.1N铁氰化钾溶 液所需的体积(V4)，然后减去单独氧化样品液中“还原糖”所需的铁氰化钾溶液体积(V3) [公式(1)]，最后再根据V4-V3的结果(ml)查表2，即可查得试样中含非还原糖(以蔗糖计)的百分数。
( V0’ - V1’ ) N
V4 = ─────────── ….............(4)
0.1
式中：V0’--滴定空白液消耗硫代硫酸钠溶液体积，ml；
V1’--滴定样品液消耗硫代硫酸钠溶液体积，ml；
V4--氧化样品液中总还原糖所需0.1N铁氰化钾溶液体积，ml；
N--硫代硫酸钠溶液当量浓度。 双试验结果允许差不超过0.05％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。
2.1.3 0.1N铁氰化钾(ml)与非还原糖含量对照可查表2。
注: 非还原糖含量<
