食品科技网-知识资料内容
一、目的与要求：
1、明确测定各类色素的原理与方法。
2、通过此实验掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。
二、原理：
聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。
三、试剂：
1、聚酰胺粉(尼龙6)
2、硫酸1：1 0
3、甲醇—甲酸溶液：6：4
4、甲醇
5、20％柠檬酸溶液
6、10％钨酸钠溶液
7、石油醚：沸程60-90℃
8、海砂：先用l：10盐酸煮沸15min，用水洗中性，再用5％氢氧化钠溶液煮沸15min，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
9、乙醇-氨溶液：取1毫升氨水，加70％乙醇至100毫升。
10、50％ 乙醇溶液
11、硅胶G。
12、PH6的水：用20％柠檬酸调节至PH 6。
13、盐酸: 1：10
14、5％氢氧钠溶液
15、碎瓷片：处理方法同海砂
16、展开剂
a、正丁醇-无水乙醇-1％氨水(6：2：3)：供纸色谱用。
b、正丁醇-吡啶-1％氨水(6：3：4)：供纸色谱用。
c、甲乙酮-丙酮-水(7：3：3)：供纸色谱用。
d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3：2)：供薄层色谱用。
e、甲醇-氨水-乙醇(5：1：10)：供薄层色谱用。
f、2.5％柠檬酸钠-氨水-乙醇(8：1：2)供薄层色谱用。
17、色素标准溶液{以下商品作为标准以100％计。
胭脂红：纯度60％；苋菜红：纯度60％；柠檬黄：纯度60%；靛蓝：纯度40％；日落黄：纯度60％，亮蓝；纯度60％。
精密称取上述色素各0.100克，用PH6的水溶解，移入100毫升容量瓶中并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1毫克商品色素。靛蓝溶液需在暗处保存。
18、色素标准使用液：用时吸取色素标准溶液各5.0毫升，分别置于50毫升容量瓶中，加PH6的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.1毫克商品色素。
四、仪器：
1、分光光度计
2、微量注射器或色素吸管
3、展开槽，25 X 6 x 4cm
4、层析缸
5、滤纸、中速滤纸，纸色谱用
6、薄层板：5 X 20em
7、电吹风机
8、水泵
五、操作方法：
1、样品处理
A、果味水、果子露、汽水：吸取50.0毫升样品于100毫升烧杯中，汽水需加热驱除二氧化碳。
B、配制酒：吸取100.0毫升样品于烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。
C、硬糖：蜜饯类，淀粉软糖：称取5.0或10.0克粉碎的样品，加30毫升水，温热溶解，若样液PH值较高，用20％柠檬酸溶液调至PH4左右。
D、含蛋奶的样品
(1)奶糖：称取10.0克粉碎均匀的样品，加30毫升乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约20毫升，立即用1：10硫酸调溶液至微酸隆再加1.0毫升1：l0硫酸，加1毫升l0％钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。
(2)蛋糕类：称取10.0克粉碎均匀的样品，加海砂少许，混匀、用热风风干样品(用手摸已干燥即可以)，加入30毫升石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪吹干后研细，全部转人G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇—氨溶液提取色素，直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下浓缩至约20毫升”起依法操作。
2、吸附分离
将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0.5-1.0克聚酰胺粉充分搅拌，用20％柠檬酸溶液调PH至4，使色素完全被吸附，若溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤(如用G3垂融漏斗过滤，可以用水泵慢慢地抽滤)。用20％柠檬酸酸化PH＝4