李氏菌选择性培养基

改良的Mc Bride琼脂（MMA）(李氏菌选择性培养基)

(Mc Bride Listeria Agar, Modified）

用    途：

用于单核细胞增生李斯特氏菌的选择性分离培养(GB/T4789.30-2003，SN0184-93)。

原    理：

胰胨、多价胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂；甘氨酸、氯化锂、苯乙醇和复达欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌；琼脂是培养基的凝固剂。

配方（每升）：

胰胨 5g

多价胨   5g

牛肉膏粉   3g

葡萄糖 1g

氯化钠   5g

磷酸氢二钠 1g

甘氨酸 10g

氯化锂 0.5g

琼脂 15g

最终pH7.3±0.2

使用方法：

1、称取本品45.5g，加入1000 mL蒸馏水或去离子水，加入2.5mL苯乙醇，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃灭菌15分钟，待冷至50℃，如需增强对其它杂菌的抑制作用，每100 mL培养基可加入3mg/mL复达欣水溶液（0.03g复达新中加入10mL灭菌蒸馏水或去离子水,过滤除菌）1mL，摇匀后倾注灭菌平皿，备用。

2、 分离。取增菌液一环，划线接种于选择性培养基MMA平板上，于35℃培养24—48h。

3、 斜射光镜检：准备解剖镜、斜射灯、平面镜，使光源以45°角照射到平面镜上，再反射为解剖镜光源。将MMA平板放在解剖镜载物台上，通过目镜垂直向下观察，李斯特氏菌菌落在此平板上，呈现蓝色或蓝灰色，扁平圆润，稍有凸起，边缘整齐，菌落较小，约为0.5mm左右。使用解剖镜观察并挑取五个可疑菌落划线接种到胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA-YE）平板上，于30℃培养24—48h，纯培养后进行鉴定。

质量控制：

质控菌株接种于30℃培养24—48h，结果如下：

菌    名 菌    号 生长状况   培养特征

单核细胞增生李斯特氏菌   CMCC(B)54002 良好 用45°斜射光镜检，可见蓝色或蓝灰色小菌落，扁平圆润，略凸起，边缘整齐

大肠埃希氏菌   ATCC2592 受抑制 ——

粪链球菌 CMCC(B)32223 受抑制 ——

贮    存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规    格：250g

参考文献：

1.GB/T4789.30－2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验

2.GB/T4789.28－2003 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 染色法，培养基和试剂

3. SN/T 0184-93  中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验